Diese Perle der Prager Gotik wurde wahrscheinlich 1231 von der heiligen Agnes von Böhmen, der Tochter von Přemysl Otakar I., gegründet und war das erste Nonnenkloster des Klarissenordens nördlich der Alpen.
Seit 1978 ist das Kloster, das sich im Besitz der Nationalgalerie befindet, ein nationales Kulturdenkmal. Ursprünglich wurde hier böhmische Kunst des 19. und frühen 20. Jahrhunderts ausgestellt, doch heute können sich die Besucher an einer einzigartigen Ausstellung mittelalterlicher Kunst aus Böhmen und Mitteleuropa erfreuen.
Dauerausstellung: Mittelalterliche Kunst in Böhmen und Mitteleuropa 1200 - 1550
Die ältesten Kunstwerke dieser erstaunlichen Sammlung stammen aus der Herrschaft der Přemysliden, während andere Schätze auch aus der Zeit der luxemburgischen Herrschaft stammen - der Herrschaft von König Johann von Böhmen und insbesondere der seines Nachfolgers Kaiser Karl IV. mit seinen Söhnen. Zu den herausragenden Malern und Bildhauern, die in der Luxemburger Zeit tätig waren, gehören der Meister von Vyšší Brod, Meister Theodoric, der Meister des Třeboň-Altars und der Meister der Krumauer Madonna.